• Papa Gregorio IX (già protettore dell'ordine come Cardinale Ugolino) è il fulcro della composizione. Siede su un trono maestoso, circondato dai cardinali in abiti scarlatti. Il suo gesto è solenne e sancisce la gloria terrena e celeste del "Poverello".

• La parte inferiore del dipinto è affollata di vescovi, frati e laici. Giotto riesce a rendere la varietà dei paramenti liturgici e delle espressioni: c'è chi prega, chi osserva con deferenza e chi sembra commentare l'evento. È una rappresentazione della Chiesa universale che si riconosce nell'esempio di Francesco.

• La scena è ambientata all'interno di una chiesa (probabilmente l'antica San Giorgio, dove Francesco fu inizialmente sepolto). Giotto dipinge i dettagli delle volte, delle bifore e degli arredi con una precisione che aumenta il senso di realismo e solennità dell'evento.

• Un elemento iconografico importante è il grande gonfalone o l'immagine del Santo che viene innalzata, simbolo della sua nuova condizione di protettore e intercessore per tutta la cristianità.

La canonizzazione, descritta con enfasi nelle Fonti Francescane, non è solo un atto religioso, ma un momento di riconciliazione tra il radicalismo evangelico di Francesco e la struttura gerarchica della Chiesa. Con questo affresco, Giotto ad Assisi chiude il cerchio aperto con il Sogno di Innocenzo III: l'uomo che sosteneva la Chiesa è ora ufficialmente elevato agli altari come suo pilastro.